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電泳中緩沖液的用途

  • 發(fā)布日期:2020-10-23      瀏覽次數(shù):1425
    •   電泳中緩沖液的用途
        生物化學(xué)家和分子生物學(xué)家使用電泳儀來分離大分子,例如蛋白質(zhì)和核酸。這使科學(xué)家能夠分離和分析復(fù)雜混合物中的單個(gè)蛋白質(zhì)或核酸序列。實(shí)驗(yàn)室中電泳的一個(gè)典型例子是微生物學(xué)家,使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分離微生物群落中產(chǎn)生的DNA片段。無論目的如何,電泳儀始終需要使用緩沖液。
        電泳通過大小,電荷和其他特性將大分子(如蛋白質(zhì)和核酸)分開。對于通過電荷分離的電泳,科學(xué)家使用緩沖液將電荷傳輸通過凝膠。緩沖液還將凝膠保持在穩(wěn)定的pH值,從而**大程度地減少了在不穩(wěn)定的pH值下蛋白質(zhì)或核酸發(fā)生的變化。
        電泳原理
        電泳根據(jù)分子的大小,電荷或其他特性沿梯度將其分離。該梯度可以是電場,或者在變性梯度凝膠電泳(DGGE)的情況下,可以是變性劑,例如尿素和甲酰胺的混合物。如果帶負(fù)電荷,蛋白質(zhì)將向陽極遷移,如果帶正電荷,則蛋白質(zhì)將向陰極遷移。由于大分子的遷移要比小分子慢,因此科學(xué)家可以測量行進(jìn)的距離并使用對數(shù)確定碎片的大小。
        變性梯度凝膠電泳
        借助DGGE,DNA沿著變性能力增強(qiáng)的梯度移動,直到該能力足以使特定的DNA片段*變性或展開。此時(shí),遷移停止??茖W(xué)家可以使用這種方法根據(jù)片段對變性的敏感性來分離片段。
        緩沖區(qū)的作用
        在電泳基于電荷分離的情況下,緩沖液中的離子會傳輸分離所需的電荷。通過提供弱酸和弱堿的緩沖液,緩沖液還將pH值保持在狹窄的范圍內(nèi)。這很重要,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)或核酸的結(jié)構(gòu)和電荷在pH發(fā)生明顯變化時(shí)會發(fā)生變化,從而阻止了正確的分離。
        典型緩沖器
        對于將電泳凝膠維持在不同的所需pH范圍,不同的緩沖液是理想的??茖W(xué)家為此目的使用的典型緩沖液包括乙酸,硼酸,磷酸和檸檬酸以及甘氨酸和牛磺酸。通常,pKa值(酸解離常數(shù))應(yīng)接近所需的pH。對于我們而言,**好提供低電荷量的緩沖器,以免傳導(dǎo)過多電流。
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